實驗人員如何安全地使用生物安全柜？

    生物安全柜前的空氣幕很脆弱，易受到干擾而造成污染。實驗中不能隨意開啟前窗的位置，操作動作緩和，手臂避免頻繁出入安全柜，以防止打擾氣流。在安全柜工作時，開關房門、人員在房間內(nèi)走動、甚至在操作人員背后咳嗽等都會形成湍流而增加微生物氣溶膠溢出量，而造成實驗室污染。

1. 位置

空氣通過前面開口進入生物安全柜的速度大約為0.45m/s。這樣速度的定向氣 流是易受到干擾的，包括人員走近生物安全柜所形成的氣流，打開窗戶，送 風系統(tǒng)調(diào)整以及開關門等都可能造成影響。

因此，為理想的是，生物安全柜應位于人員活動，物品流動以及可能會擾亂 氣流的地方。在安全柜的后方以及每一個側面要盡可能留有30cm的空間，以利 用對安全柜的維護。在安全柜的上面應留有30-35cm的空間，以便測量空 氣通過排風過濾器的速度，并便于排風過濾器的更換。

2. 操作人員 

生物安全柜如果使用不當，其防護作用就可能大大地受到影響。操作人員在移動雙臂進出安全柜時，需要小心維持前面開口處氣流的完整性，雙臂應該垂直地緩慢進出前面的開口。

手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約一分鐘，以便安全柜調(diào)整完畢并且讓里面的空氣“掃過”手和雙臂的表面以后，才可以開始對物品進行處理。要在開始實驗之前將所有必須的物品置于安全柜內(nèi)，以盡可能減少雙臂進出前面開口的次數(shù)。

3.物品放置 

二級生物安全柜前面的進氣格柵不能被紙，儀器設備或其他物品阻擋。放入安全柜內(nèi)的物品應采用70%酒精來消除表面污染?？梢栽谙緞┙竦拿砩线M 行實驗，以吸收可能濺出的液滴。所有物品應盡可能地放在工作臺后部靠近工作臺邊緣的位置，并使其在操作中 不會阻擋候補格柵?？僧a(chǎn)生氣溶膠的設備(例如混勻器，離心機等)應靠近安全 柜的后部放置。像有生物危害性的廢棄物袋，盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶 等體積較大的物品，應該放在安全柜內(nèi)的某一側。在工作臺面上的實驗操作應 該按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進行。

耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤不應放在安全柜的外面，否 則在使用這些物品時雙臂就必須頻繁進出安全柜，這樣會干擾安全柜空氣屏障 的完整性，從而影響對人員和物品的防護。

4.操作和維護

大多數(shù)生物安全柜的設計允許全天24小時工作。人員還發(fā)現(xiàn)，連續(xù)工作有助于控制實驗室中灰塵和顆粒的水平。向房間中排風或通過套管接口與專門的 排風管相連接的A1和A2型生物安全柜，在不使用時是可以關閉的。其他如二級B1和二級B2型生物安全柜，是通過硬管安裝的，就必須始終保持空氣流動 以維持房間空氣的平衡。在開始工作以前以及完成工作以后，應至少讓安全柜工作5分鐘來完成“凈 化”的過程，應即應留在將污染的空氣派出安全柜的時間。

5.紫外燈 

生物安全柜中不需要紫外燈。如果使用紫外燈的話，應該每周進行清潔，以除去可能影響其殺菌效果的灰塵和污垢。在安全柜重新認證時，要檢查紫外線的強度，以確保有適當?shù)墓獍l(fā)射量。房間中有人時一定要關閉紫外燈，以保護眼 睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害。

6.明火 

在生物安全柜內(nèi)所形成的幾乎沒有微生物的環(huán)境中，應避免使用明火。使用明火會對氣生影響，并且在處理揮發(fā)性物品和易燃物品時，也易造成危險。 在對接種環(huán)進行滅菌時，可以使用微型燃燒器或電爐，而不應使用明火。

7. 溢出 

實驗室中要張貼如何處理溢出物的實驗室操作規(guī)則，每一位使用實驗室的成員 都要閱讀并理解這些規(guī)程。一旦在生物安全柜中發(fā)生由生物學危害的物品溢 出時，應在安全柜出于工作狀態(tài)下立即進行清理。要使用有效的消毒劑，并在 處理過程中盡可能減少氣溶膠的生成。所有接觸溢出物品的材料都要進行消 毒/或高壓滅菌。

8. 安全柜防護效果的評估應該包括對安全柜的完整性，HEPA過 濾器的泄漏，向下氣流的速度，正面氣流的速度，負壓/換氣次數(shù)，氣流的煙 霧模式以及警報和互鎖系統(tǒng)進行測試。

還可以選擇進行漏電，光照度，紫外線強度，噪聲水平以及震動性的測試。在進行這些測試時，檢測人員要經(jīng)過專門的培訓，采用專門的技術和儀器設備。

9. 清潔和消毒 

由于剩余的培養(yǎng)基可能會使微生物生長繁殖，因此在實驗結束時，包括儀器設 備在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品都應清楚表面污染，并移出安全柜。在每次使用前后，要清除生物安全柜內(nèi)表面的污染。工作臺面和內(nèi)壁要用消毒 劑進行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里可能發(fā)現(xiàn)的任何微生物。在每 天試驗結束時，應擦拭生物安全柜的工作臺面，四周以及玻璃的內(nèi)外側等部位 來清除表面的污染。在對目標生物體有效時，可以采用漂白劑溶液或70%酒精 來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次進行擦拭。將安全柜一直維持運行狀態(tài)。如果要關閉的話，則應在關機前運行5分鐘 以凈化內(nèi)部的氣體。

10. 清除污染 

生物安全柜在移動以及更換過濾器之前，必須清除污染。常用的方法是采用 甲醛蒸汽熏蒸。應該由有資質(zhì)的人員來清除生物安全柜的污染。

11.個體防護裝備 

在使用生物安全柜時應穿著個體防護服。在進行和二級生物安全水平的操 作時，可穿著普通試驗服。前面加固處理的反背式試驗隔離衣具有更好的防護 效果，應在進行三級和四級生物安全水平(防護服型實驗室除外)的操作時使 用。手套應套在隔離衣的外面，可以戴加有松緊帶的套袖來保護人員的手 腕。有些操作可能還需要戴口罩和安全眼鏡。

12.警報器 

可以在兩種警報器中選擇一種來裝備生物安全柜。窗式警報器只能裝在帶有滑 動窗的安全柜上。發(fā)出警報時表明操作者將滑動窗移到了不當?shù)奈恢?。處理這種警報時，只要將滑動窗移到適宜的位置就可以了。氣流警報器報警時，表明 安全柜的正常氣流模式受到了干擾，操作者或物品當即處于危險狀態(tài)。當氣流 警報響起時，應立刻停止工作，并通知實驗室主管。

13.選擇正確類型的生物安全柜，進行安裝并正確使用，同時每年進行認證，這是 一個復雜的程序。強烈在經(jīng)過良好培訓并具有豐富生物安全操作經(jīng)驗的專家監(jiān)督下來進行上述工作。該專家應熟悉“參考文獻”部分中所列出的相 關文獻，并且經(jīng)過了有關生物安全柜各方面的培訓。操作者應接受生物安全柜操作和使用的正規(guī)培訓。