【關(guān)鍵詞】 臭氧
摘 要 采用KCF-G30臭氧發(fā)生器進行消毒,結(jié)果表明:對金黃色葡萄球菌180 min殺菌率達到90.1%,消毒后潔凈區(qū)(靜態(tài)動態(tài))表面微生物的活菌數(shù)及沉降菌菌落較消毒前有大幅度的下降,大大低于相應(yīng)潔凈的限度。
關(guān)鍵詞 臭氧;滅菌;空氣消毒
臭氧具有殺菌力強,不產(chǎn)生殘余分子污染的性能[1],其殺菌過程為強氧化作用,使微生物細胞中的多種成分產(chǎn)生反應(yīng),從而產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的變化而死亡 [2]。本文用KCF-G30臭氧發(fā)生器進行消毒,利用HVAC系統(tǒng)的循環(huán)風(fēng)作為臭氧的載體。臭氧發(fā)生器安裝在空調(diào)機組中,消毒時,先啟動消毒程序,臭氧發(fā)生器自動開啟,產(chǎn)生的臭氧通過HVAC系統(tǒng)的循環(huán)風(fēng)送到潔凈區(qū)的各房間中,使空氣中的臭氧濃度分布均勻,從而達到消毒滅菌的目的,使?jié)崈魠^(qū)生產(chǎn)的外用液體制劑達到GMP要求的相應(yīng),并對臭氧的滅菌效果進行測試。
1 儀器與材料
1.1 儀器 KCF-G30臭氧發(fā)生器2臺(康爾公司),G-1型真空式手動采樣器,潔凈車間的容積為 : 1050 m3,室內(nèi)溫度25 ℃,相對濕度60%。
1.2 菌種
金黃色葡萄球菌。
1.3 主要試劑
生理鹽水,生物指示劑。
2 方法與結(jié)果
2.1 臭氧消毒試驗
2.1.1 培養(yǎng)基平皿的制備
將Φ90 mm×15 mm的培養(yǎng)皿置于160 ℃干熱滅菌120 min,將滅菌后培養(yǎng)基加熱熔化,冷至45 ℃。 在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿,每皿約15 mL。待營養(yǎng)瓊脂凝固后,將培養(yǎng)基平皿倒置于30~35 ℃恒溫箱中培養(yǎng)48 h,若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長,即可供采樣用(制備好的培養(yǎng)基平皿可在2~8 ℃的環(huán)境中存放2周)。
2.1.2 生物指示劑的制備
從金黃色葡萄球菌第四至第十四代的斜面,挑取菌苔制備菌液。臨用前將菌液作適當(dāng)稀釋后,移種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板中,并使之在培養(yǎng)基表面均勻分布。
2.1.3 測試方法
選取關(guān)鍵房間(配液間、灌裝間)用菌液培養(yǎng)皿采樣,臭氧發(fā)生器開啟的同時打開注有菌液的培養(yǎng)皿上蓋,每隔1 h分別取回2個預(yù)先放置菌液的培養(yǎng)皿,連續(xù)監(jiān)測5 h。 把培養(yǎng)皿放入30~35 ℃恒溫箱中培養(yǎng)48 h,進行菌落計算。重復(fù)以上操作5次,取平均值計算。
2.1.4 以未經(jīng)臭氧處理的培養(yǎng)皿做空白對照。
2.1.5 臭氧發(fā)生器在不同的工作時間內(nèi)的殺菌效率以殺菌率(%)表示,見表1。表1 臭氧發(fā)生器在不同的工作時間內(nèi)的殺菌率(%)
2.2 消毒后對空間沉降菌的測試效果比較
消毒前使靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在十萬的規(guī)定值,在室內(nèi)溫度23 ℃,相對濕度60%。 測試人員必須穿戴符合環(huán)境的工作服,靜態(tài)測試時室內(nèi)測試人員不得多于2人。在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30 min后開始測試。采用沉降法,即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿,經(jīng)30 min時間,在30~35 ℃條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計算,以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)。在室內(nèi)溫度 25 ℃,相對濕度62%,開啟臭氧發(fā)生器180 min后,臭氧濃度達到10.0 mL/m3。選取關(guān)鍵房間(配液間、灌裝間)用菌液培養(yǎng)皿采樣,重復(fù)以上操作5次,計算平均值。消毒前后對空間沉降菌的測試效果比較見表2。
由表2可見,潔凈區(qū)經(jīng)臭氧消毒后,潔凈廠房空間沉降菌動態(tài)測試大大低于潔凈區(qū)所要求的限度,達到十萬級潔凈要求。
2.3 表面微生物的測試
在室內(nèi)溫度 23 ℃,相對濕度60%,開啟臭氧發(fā)生器180 min后,臭氧濃度達到10.0 mL/m3。選取關(guān)鍵房間(配液間、灌裝間),分別在設(shè)備、操作臺、墻壁、地面等的開放表面與死角、縫隙處取樣,取樣面積:25 cm2,用事先經(jīng)無菌水或緩沖液濕潤的無菌紗布或脫脂棉充分擦拭。將取樣后的棉簽放入滅菌帶塞三角瓶生理鹽水中,振搖,按微生物檢查法進行檢測,同時做陽性和空白對照。重復(fù)以上操作5次,計算平均值。消毒前后潔凈區(qū)表面微生物的測試效果比較見表3。表2 消毒前后對空間沉降菌的測試效果比較(略)表3 臭氧消毒前后潔凈區(qū)表面微生物的測試效果比較(略)
由表3可見,潔凈區(qū)經(jīng)臭氧消毒后,潔凈廠房空間表面微生物動態(tài)測試大大低于潔凈區(qū)所要求的限度,達到十萬級潔凈要求。
2.4 臭氧濃度測試
將檢測管的兩端封口在采樣器前端切割孔中折斷,然后再把檢測管插在采樣器的進氣口上,對準所測氣體,轉(zhuǎn)動采樣器手柄,使手柄上的紅點與采樣器后端蓋上的紅線相對。拎開手柄到所需位置固定。3 min后,當(dāng)檢測管變色的前端不再往前移動時,取下檢測管,從檢測管上即可讀出所測氣體的濃度。
2.4.1 臭氧濃度-時間分布測試
以臭氧發(fā)生器開啟60 min后,選取送風(fēng)管zui末端且風(fēng)量較少的房間進行(脫外衣間),室內(nèi)溫度25 ℃,相對濕度60%。用G-1型真空式手動采樣器采樣,共取5個采樣點,每一采樣點應(yīng)同時采兩個平行樣,交叉重復(fù)以上操作3次,計算平均值,結(jié)果見表4。表4 臭氧濃度-時間分布測試(略)
由表4可見,臭氧發(fā)生器開啟60 min,臭氧濃度達到5 mL/m3,并一直上升至關(guān)機前,關(guān)閉臭氧發(fā)生器90 min,臭氧濃度降到零,達到安全標準。
2.4.2 臭氧濃度-空間分布測試
選取關(guān)鍵房間(配液間、灌裝間),用G-1型真空式手動采樣器,室溫25 ℃,相濕度60%,臭氧發(fā)生器開啟60 min后采樣,共取5個點,每一采樣點應(yīng)同時采兩個平行樣,交叉重復(fù)以上操作3次,計算平均值,結(jié)果見表5。表5 臭氧濃度-空間分布測試
由表5可見,臭氧濃度-空間分布測試結(jié)果表明臭氧濃度分布均勻。
3 討論
臭氧(O3)是氧的同素異形體,由3個氧原子組成。常溫常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,很快自行分解成氧氣(O2)和單個氧原子(O)。氧原子具有很強的活性,對細菌、病毒等微生物有強的氧化作用,臭氧氧化分解了細菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必需的酶,破壞其細胞膜,導(dǎo)致新陳代謝障礙并抑制其生長,再繼續(xù)滲透破壞其細胞膜[3],將其殺死,多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普通的氧分子。本試驗證明,KCF-G30臭氧發(fā)生器對金黃色葡萄球菌180 min時殺菌率達到90.1%,240 min殺菌率達到92.1%。由表1我們可進一步看出,臭氧的濃度是隨時間的增加而增強(開機時間越長臭氧濃度越高),同時還證明消毒后潔凈區(qū)(靜態(tài)動態(tài))表面微生物測試的活菌數(shù)應(yīng)較消毒前有大幅度的下降,大大低于相應(yīng)潔凈的限度。此外還證明在臭氧發(fā)生器開啟60 min后所有潔凈室臭氧濃度達到5 mL/m3。由于甲醛熏蒸滅菌不安全,人工紫外滅菌效果又受物體阻擋及照射距離影響,臭氧則不受此影響,且臭氧具有消毒后可逐漸分解為氧,對人體無害,并能自行消除等優(yōu)點,因此可以廣泛用于生產(chǎn)車間的潔凈消毒[4]。